Materia	Carrera	Plan	Año	Periodo
(OPTATIVA I(L.B.11/10)) TÉCNICAS MOLECULARES APLICADAS EN BIOQUÍMICA CLÍNICA	LIC. EN BIOQUIMICA	11/10	2015	1° cuatrimestre

Docente	Función	Cargo	Dedicación
VARAS, SILVIA MABEL	Prof. Responsable	P.Adj Exc	40 Hs
ARIAS, JOSE LUIS	Responsable de Práctico	JTP Exc	40 Hs
LACOSTE, MARIA GABRIELA	Responsable de Práctico	JTP Semi	20 Hs

Las técnicas de biología molecular, en la actualidad, son esenciales en el laboratorio clínico. Representan una herramienta para el diagnostico, confirmación y seguimiento de numerosas patologías neonatales, metabólicas y proliferativas. El dictado del Curso se fundamenta en la necesidad del estudiante de la Licenciatura en Bioquímica de adquirir mayores destrezas en la realización de técnicas de biología molecular aplicables al diagnóstico de distintas enfermedades humanas.

General: brindar al alumno practica en técnicas moleculares realizables en un laboratorio clínico, que sirvan para la detección molecular de alteraciones a nivel de ADN y/o proteínas que sean origen de distintas patologías humanas.

Particulares:
-Conocer y manejar el equipamiento mínimo necesario para un laboratorio molecular.
-Diseñar y llevar a cabo un protocolo molecular en su laboratorio de bioquímica clínica.
-Detectar y resolver los problemas prácticos del uso de técnicas moleculares: reactivos, contaminación, controles, etc.
-Entrenamiento en la interpretación de geles e informe de resultados.
-Resaltar el uso de las técnicas de biología molecular en el diagnostico clínico de cáncer, enfermedades hereditarias y metabólicas.

Tema Nº 1
Genoma Humano. Proyecto Genoma Humano. Controversias Éticas. Mutaciones más comunes según HGMD (Human Gene Mutation Database). Deleciones y Mutaciones puntuales. Estrategias de laboratorio. Material e instrumental usado en un laboratorio de biología molecular.

Tema Nº 2
Reacción de PCR: Historia, definición, ventajas y desventajas. Eficiencia de una PCR: equilibrio entre especificidad, rendimiento y fidelidad. Requisitos para una amplificación selectiva. Variables que afectan el rendimiento. Tipos de ADN polimerasas: Taq, Tli, Pfu orígenes y características. Optimización de una reacción de PCR: elección de los iniciadores o cebadores, temperatura de anneling, concentración de magnesio y nucleótidos y número de ciclos. Fase plateau: causas.

Tema Nº3
Técnicas usadas para la determinación de deleciones e inserciones. Otras variantes de PCR: SSCP, RFLP-PCR, RT-PCR. PCR de tiempo real: bases. Usos en bioquímica clínica.

Tema Nº 4:
Diseño de oligos. Uso de herramientas del Internet para la búsqueda de secuencias de un gen en particular y diseño de oligos o iniciadores. Uso del BLAST.

Tema Nº 5
Técnicas usadas para la determinación de mutaciones puntuales. MAS-PCR, ARMS, mutagénesis mediada por PCR,Dot blot y Dot Blot reverso.

Tema Nº 6
Nuevas plataformas diagnosticas usadas en screening moleculares: Dot Blot-r (reverse dot blot hybridization), OLA (oligonucleotide ligation assay), Tepnel (Elucigene), xTAG, MOL-PCR (assay multiplex oligonucleotide ligation-PCR). Fundamentos. Discusión de seminarios.

TRABAJOS PRACTICOS DE LABORATORIO
Tema 1:
TP1: Diseño de oligonucleótidos: uso de programas para diseño de oligos. Chequeo de secuencias. Búsqueda de secuencias de cortes específicas de enzimas de restricción.
TP2: Extracción de sangre por punción venosa. Extracción de ADN. Determinación de índice de pureza y cuantificación.

Tema 2:
TP3: PCR-I: Identificación de mutaciones por mutagenesis mediada por PCR. Preparación y armado de geles de poliacrilamida no desnaturalizantes.
TP4: Siembra y revelado de PCR-I. Detección de portadores de la mutación en el gen CFTR.
PCR- ER I (RFLP-PCR) Corte con enzima de restricción del producto amplicado. Armado y corrida de geles de poliacrilamida no desnaturalizantes. Tinción de geles. Detección de enfermos fibroquísticos. Informe.

Tema 3:
TP5: PCR-II: MAS-PCR: detección de 4 mutaciones con primers alelo específicos. Armado y corrida de geles de agarosa. Tinción de geles. Observación de resultados e informe.
TP6: PCR-III:ARMS-PCR. Genotipificación de Apo E.

Tema4:
TP7: ARMS-PCR. Genotipificación por PCR. Alelos de Apo E. Armado y corrida de geles de agarosa. Tinción de geles. Observación de resultados e informe. Polimorfismos detectados.
TP8: PCR-IV: RFLP-PCR II: Amplificación de un fragmento del exón 10, del gen GALT (Galactosa 1- Fosfato Uridil Transferasa).

Tema5:
TP9: Armado y corrida de geles de agarosa. Tinción de geles. Observación de resultados e informe. Determinación Polimorfismo N314D para detección del Alelo Duarte en Galactosémicos.
TP10: Integración final y discusión de los resultados hallados. Exposición de seminarios.

La evaluación se lleva a cabo en forma continua a través de exposición de seminarios sobre conceptos teóricos y discusión de técnicas realizadas.
Alumnos Regulares:
1-El alumno estará en condiciones de cursar “Técnicas moleculares usadas en bioquímica clínica”, cuando haya regularizado Química Biológica Patológica.
El alumno deberá aprobar el 70% del plan de Trabajos Prácticos del Curso (Ord. Nº 13/03 CS Régimen Académico).
2-El alumno deberá aprobar con un 70% un único parcial final integral para regularizar.

Alumnos Promocionales:
El alumno estará en condiciones de promocionar cuando:
1- Haya asistido y aprobado el 80% de los TP.
2- Aprobado con el 80% un único parcial final integral.

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[18] 2013-Cost-Effective and Scalable DNA Extraction Method from Dried Blood Spots
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[21] 2014-APOE and BDNF Val66Met polymorphisms combine to influence episodic memory function in older adults
[22] 2014-Genomic Technologies and the New Era of Genomic Medicine.
[23] 2014- Multiplexed, lateral flow, PCR techniques for biological identification

Brindar al alumno de la Licenciatura en Bioquímica practicas en técnicas moleculares realizables en un laboratorio clínico; en particular PCR y sus numerosas variantes.

Tema 1:Genoma Humano: constitución. Mutaciones. Estrategias de diagnóstico molecular.
Tema 2:Reacción en cadena de la Polimerasa. Cinética. Componentes.
Tema 3: Técnicas moleculares para la detección de mutaciones deleciones e inserciones.
Tema 4:Diseño de oligos. Uso de Programas.
Tema 5:Técnicas moleculares para la detección de mutaciones puntuales.
Tema 6:Nuevas plataformas diagnósticas mooleculares

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