Ministerio de Cultura y Educación
Universidad Nacional de San Luis
Facultad de Química Bioquímica y Farmacia
Departamento: Bioquimica y Cs Biologicas
Área: Quimica Biologica
(Programa del año 2014)
(Programa en trámite de aprobación)
(Programa presentado el 01/07/2014 02:12:42)
I - Oferta Académica
Materia Carrera Plan Año Periodo
(CURSO OPTATIVO I (LBq)) CULTIVO DE CELULAS DE ANIMALES LIC. EN BIOQUIMICA 3/04 2014 2° cuatrimestre
II - Equipo Docente
Docente Función Cargo Dedicación
GOMEZ, NIDIA NOEMI Prof. Responsable P.Asoc Exc 40 Hs
ZIRULNIK, FANNY Prof. Colaborador P.Tit. Exc 40 Hs
BIAGGIO, VERONICA SILVINA Responsable de Práctico A.1ra Exc 40 Hs
CARGNELUTTI, ETHELINA Responsable de Práctico JTP Semi 20 Hs
CORIA, MARIELA JANET Responsable de Práctico JTP Semi 20 Hs
LARREGLE, ETHEL VIVIANA Responsable de Práctico JTP Exc 40 Hs
NAVIGATORE FONZO, LORENA SILVI Responsable de Práctico JTP Semi 20 Hs
III - Características del Curso
Credito Horario Semanal Tipificación Duración
Teórico/Práctico Teóricas Prácticas de Aula Práct. de lab/ camp/ Resid/ PIP, etc. Total B - Teoria con prácticas de aula y laboratorio Desde Hasta Cantidad de Semanas Cantidad en Horas
Periodo
 Hs. 1 Hs. 1 Hs. 2 Hs. 4 Hs. 2º Cuatrimestre 11/08/2014 05/12/2014 14 60
IV - Fundamentación
Elcultivo de célula constituye un campos de gran interes dentro de la biología. Representan una herramienta para elaborar modelos experimentales y permiten resolver numerosos problemas biológicos y sus técnicas están ampliamente utilizada tanto en las ciencias básicas, biología celular, biología molecular hasta el campo de la biotecnología que ha tenido una evolución muy rápida. Las aplicaciones son múltiples ya que los cultivos celulares son usados para la evaluación segura de compuestos tales como drogas, cosméticos, aditivos alimenticios, pesticidas y químicos industriales. Por lo que el alumno al finalizar este curso podrá conocer los principios básicos del cultivo de células.
V - Objetivos / Resultados de Aprendizaje
a)Entrenar al alumno en las técnicas de esterilización de material específico para cultivos de células.
b)Llevar a cabo las principales metodologías para el aislamiento de las células y su posterior cultivo.
VI - Contenidos
PROGRAMA ANALITICO Y/O DE EXAMEN
Tema 1: Introducción, generalidades. Cultivo primario. Líneas celulares. Medios de cultivo: requerimientos celulares, buffers, sueros, calidad del agua, contaminación. Viabilidad celular. Citotoxicidad.
Tema 2: Separación de células. Centrifugación diferencial. Gradientes discontinuos. Formación de gradientes. Recuento celular. Métodos directos e indirectos. Hemocitómetro. Citometría de flujo. Técnicas de inmunofluorescencia. Análisis de resultados. Distintas aplicaciones de la citometría de flujo. Turbidimetría. Contenido proteico.
Tema 3: Macrófagos. Poblaciones. Funciones que desempeñan. Aislamiento de macrófagos alveolares. Diferentes formas de obtención de lavados broncoalveolares. Condiciones de recolección de muestras. Importancia de la conservación del material. Diferentes parámetros como índice de injuria.
Tema 4: Hepatocitos. Aislamiento, purificación y caracterización de los tipos celulares hepáticos. Procedimientos de aislamiento. Uso de colagenasa, pronasa, EDTA. Purificación de células parenquimales y no- parenquimales. Separación de células de Kupffer y fracciones de células endoteliales. Caracterización de las fracciones celulares aisladas. Centrifugación con gradiente de densidad usando Percoll.
Tema 5: Aislamiento y cultivo de células de retina de rata. Reloj biológico y ritmo circadiano, mecanismos bioquímicos y moleculares. Fisiología de la retina, neurohormonas, las vías de transducción de señales intracelulares y la expresión génica.

VII - Plan de Trabajos Prácticos
TRABAJOS PRÁCTICOS DE LABORATORIO
1- Práctica de esterilización de material de cultivo.
2- Preparación de medios de cultivo y esterilización.
3- Obtención de macrófagos alveolares. Ensayos de viabilidad celular. Recuento e identificación. Tinción de células frescas y cultivadas.
4- Obtención de macrófagos peritoneales de rata. Ensayos de viabilidad celular. Recuento e identificación. Tinción de células frescas y cultivadas.
5- Separación de hepatocitos, cultivo primario y ensayos de viabilidad.
6- Aislamiento y cultivo de células de retina de rata.
7- Comentarios y discusión de resultados.

TRABAJOS PRÁCTICOS DE AULA:
SEMINARIOS
Exposición de 1 seminario por alumno, el cual será entregado con suficiente antelación. El tiempo para cada seminario se estipula entre 30 y 45 minutos.


VIII - Regimen de Aprobación
La evaluación se realizará con la sumatoria de los siguientes elementos:
a) Participación del estudiante durante las sesiones teóricas y prácticas.
b) Interpretación y exposición de seminarios.
c) Evaluación final escrita.
IX - Bibliografía Básica
[1] - Animal cell culture. A practical Approach, 2nd edition. Ed. By R.I. Freshney, 1992.
[2] - Hendriks, HFJ. Isolation, purification and characterization of liver cell types. Methods of enzymology, vol. 190, 1990.
[3] - Seglen, P. Preparation of rat liver cells. Methods Cell Biol, 13: 29, 1976.
[4] - Wang, SR. Isolation of rat hepatocytes with EDTA and their metabolic functions in primary culture. In vitro cellular and Developmental Biology, 21: 526, 1985.
[5] - Dalet C. Use of percoll density gradient centrifugation for preparing isolated rat hepatocytes having long- term viability. Analytical Biochemistry 122: 119, 1982.
[6] - Bader, A. Use of organotypical cultures of primary hepatocytes to analyse drug transformation in man and animals. Xenobiotica, 24: 623, 1994.
[7] - Faris, R. Isolation, propagation and characterization of rat liver serosal mesothelial cells. American Journal of Pathology, 145: 1432, 1994.
[8] - Hoffmann, B. Proliferation of fetal rat hepatocytes in response to growth factors and hormones in primary culture. Journal of cellular physiology, 139: 654, 1989.
[9] - Bronfman, M. Isolation of intact organelles by differential centrifugation of digitonin- treated hepatocytes using a table eppendorf centrifuge. Analytical Biochemistry, 255:252, 1998.
[10] - Forsell, JH. A technique for isolation of bovine hepatocytes. Journal of animal science, 60:1597, 1985.
[11] - Auger, M. J., and Ross, J. A. The biology of the macrophage. In “The Natural Immune System. The Macrophage” (Lewis, E., Mc Gee, J. O. D., Eds.), pp. 1-74, IRC, Press, Oxford,1992.
[12] - Leikauf GD, McDowell SA, Wesselkamper SC, Hardie WD, Leikauf JE, Korfhagen TR, Prows DR. Acute lung injury: functional genomics and genetic susceptibility. Chest ,121(3 Suppl):70S-75S, 2002.
[13] - Li C, Wright MM, Jackson RM. Reactive species mediated injury of human lung epithelial cells after hypoxia-reoxygenation. Exp Lung Res; 28(5):373-89, 2002.
[14] -Biaggio VS, Alvarez-Olmedo DG, Perez Chaca MV, Salvetti NR, Valdez SR, Fanelli MA, Ortega HH, Gomez NN, Gimenez MS. Cytoprotective mechanisms in rats lung parenchyma with zinc deprivation. Biometals. 2014; 27(2):305-15
[15] - Obe G, Beek B. The human leucocyte test system VII. Further investigations concerning micronucleus- derived premature chromosome condensation. Humangenetik 30(2): 143-54, 1975.
[16] - Preston RJ, Au W, Bender MA, Brewen JG, Carrano AV, Heddle JA, McFee AF,Wolff S, Wassom JS. Mammalian in vivo and in vitro cytogenetic assays: a report of the U.S. EPA's gene-tox program. Mutation Research 87(2):143-88, 1981.
X - Bibliografia Complementaria
 
XI - Resumen de Objetivos
 
XII - Resumen del Programa
PROGRAMA SINTETICO (no más de 300 palabras):

Tema 1: Introducción, generalidades. Cultivo primario. Líneas celulares. Medios de cultivo. Viabilidad celular. Citotoxicidad.
Tema 2: Separación de células. Recuento celular. Hemocitómetro. Citometría de flujo. Técnicas de inmunofluorescencia. Distintas aplicaciones de la citometría de flujo. Turbidimetría.
Tema 3: Macrófagos.
Tema 4: Hepatocitos.
Tema 5: Células de retina de rata. Reloj biológico y ritmo circadiano.
XIII - Imprevistos
 
XIV - Otros