Ministerio de Cultura y Educación
Universidad Nacional de San Luis
Facultad de Química Bioquímica y Farmacia
Departamento: Bioquimica y Cs Biologicas
Área: Morfologia
(Programa del año 2011)
I - Oferta Académica
Materia Carrera Plan Año Periodo
TÉCNICA HISTOLÓGICA ANAL. BIOLOGICO 15/04 2011 1° cuatrimestre
II - Equipo Docente
Docente Función Cargo Dedicación
MOHAMED, FABIAN HEBER Prof. Responsable P.Adj Exc 40 Hs
DOMINGUEZ, NORA SUSANA Prof. Colaborador P.Asoc Exc 40 Hs
AGUILERA MERLO, CLAUDIA ISABEL Responsable de Práctico JTP Exc 40 Hs
RODRIGUEZ, HUGO ALBERTO Responsable de Práctico JTP Simp 10 Hs
ACOSTA, MARIANO Auxiliar de Laboratorio A.1ra Semi 20 Hs
III - Características del Curso
Credito Horario Semanal Tipificación Duración
Teórico/Práctico Teóricas Prácticas de Aula Práct. de lab/ camp/ Resid/ PIP, etc. Total B - Teoria con prácticas de aula y laboratorio Desde Hasta Cantidad de Semanas Cantidad en Horas
Periodo
7 Hs.  Hs.  Hs.  Hs. 7 Hs. 1º Cuatrimestre 16/03/2011 24/06/2011 15 105
IV - Fundamentación
El Curso Técnica Histológica se dicta para alumnos de segundo año de la carrera Analista Biológico. En el mismo se impartirán los conocimientos básicos para el desarrollo de las diferentes técnicas que se utilizan en el Laboratorio de Histología destinadas al estudio de muestras de origen animal, tanto a nivel de microscopía óptica como electrónica. Los contenidos del Curso son necesarios para complementar la formación de un Analista Biológico y su desempeño profesional, por ejemplo en Laboratorios de Anatomía Patológica, Forense, Laboratorios de Investigación, entre otros.
V - Objetivos / Resultados de Aprendizaje
OBJETIVOS:
*Estudiar las técnicas y metodologías para la obtención de especimenes histológicos y su diagnóstico al
microscopio óptico.
*Adquirir destrezas en lo referente a las medidas de seguridad, organización, instrumental y reactivos necesarios en un Laboratorio de Histología, como así también en técnicas histológicas convencionales, histoquímicas e inmunohistoquímicas.
*Adoptar criterios para la selección de las técnicas a utilizar según las necesidades y para detectar posibles artefactos de técnicas que puedan interferir en una correcta descripción.
*Conocer los fundamentos de microscopía óptica, microscopía electrónica y sus diferentes variantes.
VI - Contenidos
PROGRAMA ANALÍTICO DE EXAMEN:


Bolilla 1. Organización tisular de los mamíferos. Distintos tipos de tejidos, clasificación, estructura e histoarquitectura
tisular. Obtención de muestras. Precauciones. Generalidades de la técnica histológica. Fijación. Concepto,generalidades y condiciones para lograr una correcta fijación. Clasificación y propiedades de los reactivos fijadores. Artificios de fijación.

Bolilla 2. Inclusión de las muestras biológicas: Generalidades. Tratamiento preliminar de las muestras:deshidratación. Reactivos deshidratantes y aclarantes. Medios de inclusión; parafina, resinas epoxídicas. Moldes de inclusión. Errores de inclusión.


Bolilla 3. Métodos para obtención de cortes histológicos. Generalidades. Micrótomos: Usos y cuidados. Micrótomo de deslizamiento y rotación. Micrótomo de Congelación. Cuchilla ó navaja, afilado y asentado. Tipos, cuidados y uso de las cuchillas. Confección de los cortes: Características de un buen corte. Estiramiento. Formas de recoger un corte. Pegado de las
secciones histológicas. Medios de adhesión: Albúmina, gelatina. Artificios de seccionamiento.

Bolilla 4. Coloraciones. Generalidades. Colorantes. Composición química, comportamiento de los colorantes y clasificación. Acidofilia y basofilia. Ortocromasia y metacromasia. Coloración de Hematoxilina-Eosina. Preparación de la hematoxilina de Harris. Técnica tricrómica de Masson. Otros métodos tricrómicos de importancia. Montaje de las preparaciones coloreadas para preparados deshidratados (permanentes), Permount, Entellán, DPX, Polymount,etc. Montaje para preparados no deshidratados (temporarios); glicerina. Precauciones del montaje. Artificios de
coloración.

Bolilla 5. Histoquímica: Concepto y generalidades. Técnica de ácido periódico de Schiff (PAS) para glucoproteínas.
Sudán para lípidos. Impregnaciones metálicas, concepto y generalidades. Técnicas argénticas. Técnicas para el estudio
de muestras óseas, conceptos generales. Método de descalcificación.

Bolilla 6. Inmunohistoquímica: Concepto y generalidades. Antígeno y Anticuerpo. Reacción Antígeno Anticuerpo.
Anticuerpos primarios, secundarios y monoclonales. Marcadores enzimátcos y fluorescentes. Concepto de sensibilidad
y especificidad de una prueba inmunohistoquímica. Técnicas directas e indirectas. Precauciones. Controles de calidad.
Otras técnicas de importancia clínica.

Bolilla 7. Métodos para microscopia electrónica de transmisión y de barrido: Generalidades. Obtención y fijación de las muestras. Post-fijación. Inclusión. Ultramicrótomos. Cuchillas de diamante y vidrio. Cortes Finos y ultrafinos. Grillas. Contrastes, acetato de uranilo y citrato de plomo. Diferentes tipos de Microscopios ópticos: de fase, de polarización, campo oscuro, fluorescencia y confocal.


VII - Plan de Trabajos Prácticos
TRABAJOS PRÁCTICOS:

1- Laboratorio de Histología: Segurdidad e Higiene. Preparación de mezclas fijadoras.

2- Obtención de muestras y fijación para microscopía óptica.

3- Deshidratación de la muestra.

4- Inclusión de la muestra en parafina.

5- Cortes histológicos. Micrótomo de deslizamiento y rotación (Parte I).

6- Cortes histológicos (Parte II).

7- Preparación colorantes. Coloración de Hematoxilina-Eosina (Parte I).

8- Coloración de Hematoxilina-Eosina (Parte II).

9- Obtención de extendidos sanguíneos. Coloración de May Grünwall-Giemsa (MGG).

10- Preparación de reactivos y desarrollo de la técnica histoquímica de P.A.S.

11- Técnica inmunohistoquímica.

12- Microscopía electrónica: Ultramicrótomo y microscopio electrónico de transmisión.
VIII - Regimen de Aprobación
Regimen de Aprobación:

Regimen Regularidad (con examen final):
*Asistencia al 80% de las Clases Teóricas
*Asistencia y Aprobación 100 % Trabajos Prácticos
*Aprobación de las examinaciones parciales
*Elaboración de monografía

Regimen Promoción:
*Idem anterior
*Coloquio integrador al finalizar el Curso
IX - Bibliografía Básica
[1] BIBLIOGRAFÍA:
[2] 1- Técnicas de Histología Animal. Martoja R. y Martoja-Pierson M. Edit. Toray-Masson. (Barcelona). 1970.
[3] 2- Histoquímica. Teórica y Aplicada. A.G. Everson Perase Edit. Aguilar. 1960.
[4] 3- Manual de Microscopía Electrónica para Biólogos. Mercer E.H. y Birbeck M.S.C. Edit. Blume. 1974.
[5] 4- Staining Methods for Sectioned Material. Lewis P.R. and Knight D.P. Edit. Audrey M. Glauert. Elsevier. 1977.
[6] 5- Introduction to Immunocytochemistry. Polak J.K. and Van Noorden S. Scientific Published. 1997.
[7] 6- Texto y Atlas de Histología. Gartner L. And Hiatt J.. 2002.
[8] 7- Bloom Fawcett Tratado de Histología. Don W. Fawcett. McGraw-Hill Interamericana. 1995.
[9] 8- Apuntes Teóricos, con actualización permanente, confeccionados por los Docentes del Curso.
X - Bibliografia Complementaria
[1]
XI - Resumen de Objetivos
OBJETIVOS: Estudiar las técnicas y metodologías para la obtención de especimenes histológicos y su diagnóstico al
microscopio óptico.
XII - Resumen del Programa
Organización tisular de los mamíferos. Distintos tipos de tejidos, clasificación, estructura e histoarquitectura tisular. Técnicas Histológicas: metodologías, fundamentos y alcances. Microscopía óptica: fijación, clasificación de los fijadores.
Deshidratación e inclusión. Preparación de cortes y extendidos. Coloración: basofilia y acidofilia, meta y ortocromasia.
Métodos histoquímicos, citoquímicos e inmunohistoquímicos. Microscopio de luz: fundamento. Unidades en microscopía.
Concepto generales sobre: microscopía de fase, de polarización, campo oscuro y fluorescencia. El principio de la microscopía
confocal, electrónica de transmisión y barrido.
XIII - Imprevistos
 
XIV - Otros